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FAQ/常见问题

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培养基的注入时机和温度:一个被低估的成败关键

Q Q:过滤完成后多久必须注入培养基?可不可以先放一放?
A:药典没有明确规定过滤后到注入培养基的最长间隔,但微生物学的通则要求越快越好——过滤完成后被截留在膜面上的微生物处于无营养的干燥或半干燥状态(膜面残留极少量的冲洗液),进入饥饿应激——时间越长、菌的活力下降越多、复苏越困难。保守推荐——过滤结束后15分钟内注入培养基。如果因为某些原因无法在15分钟内注入——将培养器水平放置于4度冷藏(低温减缓微生物代谢,饥饿损伤减慢),但总延迟不应超过2小时并在实验室记录中备注延迟原因。那艾仪器NAI-JJY的程序可设置过滤到加培养基的段间提醒——过滤完成后屏幕弹窗提示请注入培养基并倒计时。
Q Q:培养基需要预热到多少度再注入?
A:FTM培养基(需氧菌和兼性厌氧菌培养用,培养温度30至35度)——预热到35度注入。TSB培养基(真菌和需氧菌培养用,培养温度20至25度)——建议室温注入(不需要预热,因为最终培养温度就是20至25度,预热到35度后再降到25度反而对微生物产生冷热交替应激)。注入温度的三个禁忌——温度超过45度会热休克微生物(特别是刚从饥饿状态下复苏的菌);温度低于15度会冷休克微生物且冷液体注入量大会将培养器内温度瞬时拉低到非预期值;温度差异超过15度的培养基连续注入同一培养器(如先注35度FTM后注20度TSB)——温差对滤膜的热胀冷缩可能影响膜的结构完整性。
Q Q:培养基温度太低注入会有什么后果?怎么在操作中把控温度?
A:培养基温度低于40度时粘度增大——注入培养器后不能快速均匀地浸润滤膜表面,部分膜面干燥区的微生物得不到营养供应,可能导致阳性漏检。但温度太高也不行——超过50度时热敏感的细菌会被热灭活,同样造成漏检。那艾仪器NAI-JJY推荐的标准操作——培养基从水浴锅中取出后用红外测温枪确认温度在44至46度之间,然后30秒内完成注入。如果一次操作多个培养器,建议每次只取一瓶注入一个培养器、再取一瓶注入下一个。批量检验的优化方案——使用恒温金属浴代替水浴锅,将培养基瓶放在48度的金属浴孔中整批保温——随取随注。
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