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FAQ/常见问题

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阳性对照的设置原则与操作规范

Q Q:无菌检查的阳性对照具体怎么做?操作上有什么特别要求?
A:取与供试品检验相同的条件过滤——使用同批次的泵管、同批次的培养器、同批次的培养基、同样的操作人员、同样的超净台环境。最后注入培养基前,向培养器中加入不超过100CFU的阳性对照菌悬液(通常用金黄色葡萄球菌CMCC(B)26003)。阳性对照菌悬液的制备——取新鲜菌种(不超过第五代)在TSB中35度培养18至24小时,用无菌生理盐水梯度稀释至约100 CFU/mL——取1mL加至培养器中。那艾仪器NAI-JJY的程序中阳性对照为独立程序——参数设置与供试品相同,仅最后一步加阳性对照菌悬液而非加供试液——便于操作员在批量检验中区分阳性对照批次和供试品批次。
Q Q:阳性对照为什么必须每批都做?阶段的阳性对照不行吗?
A:根据USP要求每批阳性对照是强制性的,ChP允许阶段性但推荐每批。每批阳性对照的意义——排除批次内的假阴性——如果某一批供试品呈阴性但同批阳性对照也未生长——说明该批次的培养基、培养器或超净台操作有问题,该批检验结果无效——需要用新批次培养器重新检验。阶段性阳性对照只能监控系统长期趋势,无法为每一批的阴性结果提供直接的有效性证据。GMP审计中,如果企业只做阶段性阳性对照,FDA审计老师几乎一定会开具观察项。那艾仪器NAI-JJY智能型的程序队列功能可以连续处理供试品加阳性对照——阳性对照自动在相同程序参数下运行,避免操作员手动调参造成的批次差异。
Q Q:阳性对照的菌种传代次数有什么讲究?为什么不能超过5代?
A:药典规定阳性对照试验所用的标准菌株传代次数不得超过5代——防止菌株在多次传代过程中发生遗传漂变,导致阳性对照不能真实反映供试品的抑菌性。实际操作——从菌种保藏中心购得0代冻干菌种作为种子批,在实验室中复苏后为第1代。每次药敏试验或阳性对照使用第2至第3代菌种。第4至5代仅用于日常质控和培训——不做正式阳性对照。那艾仪器NAI-JJY的审计追踪中记录了每批阳性对照使用的菌种批号和代数——审计时可以追溯。实验室应建立菌种传代台账确保不超过5代红线。
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