精制鱼油胆固醇测定在国标GB 5009.128-2016的应用与优化「那艾」

鱼油是油性鱼类组织中提取的油脂,内含多种不饱和脂肪酸，具有预防冠心病、抑制血小板凝聚、舒张血管、调节血脂的作用，对心血管亚健康人群有益处l14]。但鱼油中胆固醇含量较高,海洋鱼油中的胆固醇含量更甚,而高胆固醇食物大量摄入易导致血液胆固醇含量升高，诱发一系列心血管疾病57]。因此，对鱼油类产品进行胆固醇指标监控有重要的意义。

根据GB 5009.128-2016《食品安全国家标准食品中胆固醇的测定》8所述,胆固醇的测定有3个方法，分别是气相色谱法、高效液相色谱法与比色法。鱼油属于动物性食品,因此3种方法均适用。考虑到比色法的测定原理为固醇类化合物与酸作用产生i颜色物质，当样品音胆国E大以外的固醇类物质时，同样会发生显色反应，方法特异性较差，导致测定结果偏大l3。利用色谐效(传是性强、液相色谱)进行分析的方法,具有分隔双E问、符研名个业准确度高、人为误差带入少等优点，因而被较多企业与第三方检测机构选用，为目前主流的分析方法。但完全按照GB 5009.128-2016所述进行测定，皂化加热后冷却放置的时间不同导致样品回收率、含量相对标准偏差(rclativestandard deviation，RSD)大等问题;批量处理样品若采用电热套进行皂化加热手段,需借助排插开联多个电润书同时加热以缩短实验时间,存在安全用电隐患，不适当的测定方法出现专属性不符合规定等问题。本文针对在分析测定精制鱼油胆固醇过程中遇到的问题及探索出的解决方案进行总结,为日后精制鱼油中胆固醇的分析工作提供经验参考。

那艾-全自动冷凝回流提取仪

皂化:精密称取鱼油样品0.25 g，于250 mL平底烧瓶中,加入30 mL无水乙醇,10 mL 60%(质量分数)氢氧化钾溶液,混匀。将试样于100 °℃水浴皂化回流1 h，不时振荡以防止试样黏附在瓶壁上，皂化结束后,用5 mL无水乙醇自冷凝管顶端冲洗其内部，取下烧瓶,室温放置冷却。

提取:定量转移全部皂化液于250 mL分液漏斗中，用30 mL水，分3次冲洗圆底烧瓶，洗液并入分液漏斗，再用40 mL石油醚-乙醚混合液(1:1，体积比),分3次冲洗圆底烧瓶并入分液漏斗。振摇2 min，静置，分层。转移水相,合并3次有机相,每次用100 mL水洗涤提取液至中性,初次水洗时轻轻旋摇。为防止乳化,提取液经约10 g无水硫酸钠脱水后转移到250 mL圆底烧瓶中。

浓缩:将上述圆底烧瓶中的提取液于40℃旋蒸至干，残渣用无水乙醇溶解并定容至5 mL，得到样品溶液。

本研究以GB5009.128-2016《食品安全国家标准食品中胆固醇含量测定》为参考依据，分别对测定方法、皂化加热方式、皂化冷却后放置时间进行优化与考察，优化过的条件经过了定量限、线性、精密度、加标回收率、稳定性与系统耐用性的考察，证实该方法适用于精制鱼油胆固醇的含量测定。